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   ELISA實驗成功的原因有哪些？您的實驗思路是怎樣的？ELISA試劑盒作為上海恒遠主營且熱銷的產品之一，ELISA實驗技術問題必然是售后服務中的一大焦點。日前上午9時，我公司展開2016酶聯免疫技術交流會，會議主題也正是我今日資訊主題：ELISA實驗成功的原因重在“點子”上。
    會中，我司技術總監表示：從標本的采集到實驗操作步驟完畢，每一個流程都是影響實驗的因素。當然，這是在試劑盒質量保證且正確保存的條件下。為什么說ELISA實驗成功的原因重在“點子”上？只要每一步流程都能夠達到正確的“點”上，那么您定能夠做出的實驗。
一、檢測標本的收集：
    ①收集血液的試管應為一次性的無熱原，無內毒素試管。
    ②血漿抗凝劑推薦使用EDTA。避免使用溶血，高血脂標本。
    ③標本應清澈透明，懸浮物應離心去除。
    ④標本收集后若不及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃，-70℃電冰箱內，避免反復凍融，3-6月內檢測。
   在收集樣本前都必須有一個完整的計劃，必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集后當天就進行。
  檢測的樣本，及時儲存在4℃備用。對于隔天再檢測的樣本，及時分裝后凍存在-20℃備用，有條件的，-70℃凍存備用。標本應避免反復凍融。
二、不斷學習ELISA操作技巧：
    1.操作前應對實驗的物理參數有充分的了解，如環境溫度（保持在18 C～25℃）、反應孵育溫度和孵育時間、洗滌的次數等，要先查看水育箱溫度，ELISA試劑盒是否符合要求。
    2.正確使用加樣器加樣器應垂直加入標本或試劑，避免刮擦包被板底部。加樣過程中避免液體外濺，血清殘留在反應孔壁上，加樣器吸頭要清洗干凈，避免污染，加樣次序要與說明書一致，否則可導致結果錯誤，實驗重復性差。
    3.手工洗板加洗液時沖擊力不要太大，洗滌次數不要超過說明書推薦的洗滌次數，洗液在反應孑L內滯留的時間不宜太長。不要使洗液在孑L間竄流，造成孔問污染，導致假陰性或假陽性。
    4.要保證加液量一致 我們在使用時感覺滴瓶加液不如加樣器好，滴瓶不易控制加液量不準，造成顯色不統一，判斷錯誤。
    5.顯色液量不可過多 加樣的工作環境不能處于陽光直射的環境下，加顯色系統后要避光反應，顯色液量不能過多，以免顯色過強。
三、操作指南：
操作指南：固相包被→加待測樣品→溫育→洗滌+加酶標物→溫育→洗滌→加底物→溫育一加終止液→比色→判定結果
四、OD值的范圍：
    在ELISAzui后步驟中OD值的范圍也是有一定講究的，不容小覷。說到OD值范圍，我公司業務員在售后問題的處理過程中也常會有客戶咨詢其范圍是多少。其實是不一定的，我們以AβELISA為例，2以上就會偏飽和，變化不容易做出來，所以一般把model組控制在0.8-1.5，而control組的話基本跟空白差不多，不到0.1。
    所以，一般情況下我們會建議先做個標曲以及樣品的梯度稀釋，然后選擇在標曲中間位置的樣品稀釋度作為以后的參照稀釋度。
    同時，也與使用的detector有關，detector有自己的檢測范圍和線性范圍。如果實驗室使用的儀器，說明書上說檢測范圍是0~4，線性范圍是0~3，但我們自己的實驗結果顯示的線性范圍是0~2OD。如果只檢測空白的沒有經過處理的Elisa孔，大致在0左右。
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