√资源天堂中文在线丨黄色一级网丨少妇饥渴xxhd天美xxhd丨99精产国丨欧美成人精品视频在线不卡丨狠狠综合久久久久综合网站丨最近免费中文字幕中文高清百度丨中文在线www天堂网丨免费无码黄动漫在线观看丨99这里有精品视频视频丨久久久99国产精品免费丨黄色大全在线观看丨5678少妇影院丨成人性生交视频免费观看丨国产无套粉嫩白浆内谢在a丨久久国产主播福利在线丨欧洲精品久久久av无码电影丨亚洲国产良家在线观看丨欧美人与物videos另类丨人妻少妇88久久中文字幕丨日本真人做爰免费视频120秒丨国内精品九九久久精品丨av一卡二卡丨欧美视频网址丨成 人 黄 色 片 在线播放

1. 包被過程(注意設置空白對照,陰性對照):

將所用抗原用包被稀釋液稀釋到適當濃度(一般所需抗原包被量為每孔20-200μg),每孔抗原加入100μl, 置37℃,4h,或4℃,24h;棄去孔中液體.(為避免蒸發(fā),板上應加蓋或將板平放在底部有濕紗布的金屬濕盒中)

2. 封閉酶標反應孔:

5%小牛血清置37℃封閉40min.封閉時將封閉液加滿各反應孔,并去除各孔中的氣泡,封閉結束后用洗滌液滿孔洗滌3遍,每遍3min.

洗滌方法:吸干孔內反應液,將洗滌液注滿板孔,放置2min略作搖動,吸干孔內液,傾去液體后在吸水紙上拍干。洗滌次數3次

3. 加入待檢測樣品(建立合適的濃度梯度):

檢測時一般采用1:50-1:400的稀釋度, 應采用較大稀釋體積進行,一般保證樣品吸取量>20μl.

將稀釋好的樣品加入酶標反應孔中,每樣品至少加雙孔, 每孔100μl,置于37℃,40-60min.用洗滌液滿孔洗滌3遍,每遍3min.

4. 加入酶標抗體:

酶標抗體: 根據酶結合物提供商提供的參考工作稀釋度進行. 37℃,30-60min之間.短于30min往往結果不穩(wěn)定.每孔加100μl.洗滌同前。

5. 加入底物液(現用現配):

shou選TMB-過氧化氫尿素溶液,OPD-過氧化氫底物液系統(tǒng)次之.

底物加入量:每孔100μl,置37℃避光放置3-5分鐘,加入終止液顯色.

6. 終止反應:

每孔加入終止液50μl終止反應,于20min內測定實驗結果.

7. 結果判斷:

OPD顯色后采用492nm波長,TMB反應產物檢測需要450nm波長.檢測時一定要首先進行空白孔系統(tǒng)調零.用測定標本孔的吸收值與一組陰性標本測定孔平均值的比值(P/N)表示,當P/N大于2時作為抗體的效價.(數值的大小依具體檢測要求而定.)